试剂名称：pGBKT7 Vector (pGBKT7 DNA🧬-BD Vector) 酵母双杂交载体
储存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋运输。
产地：西安强化生物
中英文名称：pGBKT7 Vector (pGBKT7 DNA🧬-BD Vector) 酵母双杂交载体
载体大小：7303 bp（双链DNA🧬环状结构）。
启动子：包含ADH1启动子（用于驱动表达）、T7启动子（用于体外转录和翻译）。
复制子：包含2μ ori（酵母复制子）和pUC ori（大肠杆菌复制子）。
抗性基因：Kan（卡那霉素抗性）和TRP1（色氨酸合成基因，用于筛选）。
克隆位点：多克隆位点（MCS），支持限制性内切酶切割和克隆。
表位标签：c-Myc表位标签，用于蛋白检测。
用途：用于酵母双杂交系统，表达GAL4 DNA🧬结合域（DNA🧬-BD）与目标蛋白的融合蛋白。
一、背景与结构：（1）基本信息与结构元件
载体大小： pGBKT7 的全长约为 7303 bp 。
启动子：
ADH1 启动子 (ADH1p)： 这是一个来自酵母酒精脱氢酶1基因的启动子，能够在酵母中实现组成型的高水平表达，驱动 GAL4 DNA🧬-BD 融合蛋白的生成 。
T7 启动子 (T7p)： 位于多克隆位点的上游，允许在体外（in vitro）使用 T7 RNA 聚合酶进行转录和翻译，或在大肠杆菌中表达 。
筛选标记：
KanR： 赋予大肠杆菌对Kan的抗性，用于在细菌中筛选和扩增质粒 。
TRP1 基因： 这是一个色氨酸合成基因，作为酵母中的营养缺陷型筛选标记。当 pGBKT7 被转化到 trp1 基因缺陷的酵母菌株中时，只有成功获得该质粒的酵母才能在缺少色氨酸的培养基上生长 。
融合标签：
c-Myc 表位标签： 位于多克隆位点的下游，会融合到目标蛋白的 C 端。使得研究人员可以使用抗 c-Myc 的抗体，通过 Western Blotting 等方法来检测融合蛋白的表达水平和完整性 。
GAL4 DNA🧬-BD (氨基酸 1-147)： 这是 pGBKT7 的核心功能域，它能够特异性地结合到酵母报告基因上游的 GAL4 上游激活序列，将诱饵蛋白锚定在报告基因的启动子区域 。
复制原点：
pUC ori： 使质粒能够在大肠杆菌中高拷贝复制 。
2μ ori： 酵母 2μ 质粒的复制原点，确保 pGBKT7 能够在酵母细胞中以高拷贝数的形式稳定存在 。
多克隆位点 ： pGBKT7 载体含有一段精心设计的 DNA🧬 序列，包含多个限制性内切酶切点，如 EcoRI, BamHI, SmaI, PstI, SalI, NdeI, NcoI, SfiI 等，方便了外源基因的定向克隆。
二、研究与应用前景：pGBKT7 作为一个成熟、可靠的工具载体，在后基因组时代依然发挥着不可或缺的作用。
大规模蛋白互作网络图谱绘制： 结合高通量筛选技术，利用 pGBKT7 构建的诱饵可以系统性地筛选 cDNA🧬 文库，用于绘制特定物种、特定组织或特定信号通路下的蛋白质相互作用网络。
关键功能蛋白的互作伴侣发现：针对某个功能未知的关键蛋白，利用 pGBKT7 构建诱饵，筛选其互作伴侣，是阐明其生物学功能和作用机制的有效途径。
疾病相关蛋白的研究与药物靶点发现： 研究致病蛋白与宿主蛋白的相互作用，可以揭示疾病发生机制，并为寻找新的药物靶点提供线索 。
验证其他实验方法发现的互作： Y2H 系统常被用作一种独立的验证方法，来确认通过免疫共沉淀-质谱（Co-IP-MS）等其他技术发现的潜在蛋白互作。
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用于科研相关领域，不能用于人体实验！
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