Cyanine5 Tyramide（Cy5-Tyramide）是一种基于花青素染料结构（Cyanine 5, 简称Cy5）与酪胺（tyramide）偶联而成的荧光探针分子，是高灵敏度信号放大技术——TSA（Tyramide Signal Amplification）系统的核心标记试剂之一。其特点是荧光强度高、空间定位准确、背景信号低，非常适合用于免疫组织化学（IHC）、免疫荧光（IF）、原位杂交（ISH）等高分辨成像实验中。
作用机理与反应特性
Cy5-Tyramide 并不直接与目标分子结合，而是通过“TSA酪胺信号放大机制”实现标记。其反应过程如下：
目标定位
首先，通过一抗/二抗系统将辣根过氧化物酶（HRP）偶联到目标蛋白、核酸或抗体上；
Tyramide激活
在HRP存在下，Cy5-Tyramide 通过氧化反应生成高活性的游离自由基（tyramide radical）；
共价结合
自由基选择性攻击组织或细胞内的酪氨酸残基，形成共价连接，牢固地将Cy5标记物固定在目标周围。
信号增强
一个HRP分子可以催化多个Cy5-Tyramide分子的活化，因而大大增强了信号强度📶，提高检测灵敏度，甚至可达皮摩尔级别（pM sensitivity）。
应用
1. 免疫荧光（Immunofluorescence, IF）
在多重荧光免疫标记实验中，Cy5-Tyramide被用于标记表达量较低的蛋白，以实现精确定位。例如神经元分型标记、『肿瘤』微环境中稀有细胞因子检测等。
2. 原位杂交（ISH / FISH）
通过引物或探针将HRP酶定位于特定RNA/DNA🧬区域，再使用Cy5-Tyramide染色，实现核酸可视化，尤其在组织切片中可获得高清图像。
3. 信号放大检测
在检测微弱目标信号如细胞因子、转录因子、病毒蛋白等低丰度分子时，Cy5-Tyramide结合TSA系统提供了极高的灵敏度，广泛应用于基础研究和临床诊断。
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QY小编zyl分享2025.7.18
