DUSP6对Notch1的phospho-Y2116的去磷酸化是其调控CRC细胞增殖的关键
功能回复实验显示，DUSP6通过Notch1调控结直肠癌细胞增殖（图2a-b）。随后IP-MS筛选NTM上可能被DUSP6靶向的磷酸化位点。NTM中共检测到17个磷酸丝氨酸、3个磷酸苏氨酸和2个磷酸酪氨酸，其中只有phospho-Y2116（p-Y2116）是DUSP6过表达时失去磷酸化的酪氨酸残基。此外，两个丝氨酸残基S1951和S2205在DUSP6 过表达中也失去了磷酸化。
为了确定p-Y2116、p-S1951和p-S2205在Notch1信号传递中的重要性，构建Notch1失活突变体Y2116A、S1951A和S2205A，通过CSL（CBF1/RBP-Jκ）报告基因和Notch1通路报告基因检测。发现DUSP6过表达导致Notch1介导的转录活性增加，NICD Y2116A的细胞中转录活性增加（图2c）。表明在这三种突变中，只有Y2116A突变使NTM具有逃避泛素化和随后的蛋白酶体降解的能力。随后的功能实验也显示NTM WT和NTM Y2116A均能挽救DUSP6 KO细胞增殖减少的情况（图2d）。
表明Y2116是DUSP6控制Notch1活性的磷酸化位点。
图2
全文分享：《Nat Commun》解读：去磷酸化抑制泛素化！DUSP6调控Notch1在结直肠癌中的信号传导。
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